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B. 포도당의 효소 적 결정

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대부분의 생체 분자는 스펙트럼의 가시 영역 또는 자외선 영역에서 빛을 흡수하지 않습니다. 또한, 그들은 일반적으로 유사한 화학 반응을 일으키는 다른 화합물과 혼합되어 존재합니다. 두 가지 어려움은 적절한 효소를 사용하여 검출 할 대사 산물을 선택적으로 유색 물질로 전환하고 광 흡수 강도에 의해 결정 됨으로써 극복 할 수 있습니다..

혈액 내 포도당을 측정하는 일반적인 방법 (당뇨병 참조)은 두 가지 연속적인 반응을 기반으로합니다. 1) 글루 코노 락톤과 과산화수소 H의 형성2영형2 효소 포도당 산화 효소의 작용하에, 2) 과산화 효소에 의해 촉매 작용을받는 반응에서 과산화수소에 의한 무색 물질의 착색 녹색 화합물로의 산화. 샘플에 존재하는 모든 포도당이 소비되면 형성되는 착색 물질의 양은 초기 포도당 함량에 정비례하는 빛 흡수에 의해 결정될 수 있습니다..

"효소 분석"섹션의 기사 :

  • 효소 분석
  • A. 분광 광도법의 기초
  • B. 젖산 탈수소 효소 활성의 결정
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포도당 측정을위한 현대적인 방법

Gerasimenko V.A., Ph.D., Kurilyak O.A., Ph.D..

신문 "A / O Unimed의 뉴스"의 아카이브에서

혈액 내 포도당 농도 측정은 CDL에서 가장 자주 수행되는 생화학 연구 중 하나입니다. 이 검사의 예외적 인 인기의 이유는 당뇨병 발병률이 높기 때문입니다. 이 검사는 병원과 종합 병원 모두에서 시행됩니다. 당뇨병 환자는 집에서 혈당 수치를 연구해야합니다.이 정보가 없으면식이 요법, 운동, 인슐린 및 기타 항고 혈당 제 사용을 조정하기가 어렵 기 때문입니다. 검사의 매우 중요한 중요성과 수행 된 대규모 연구로 인해 개발자는 혈액 내 포도당 농도를 결정하는 다양한 유형의 장치와 방법을 개발하게되었습니다..

현재 포도당을 결정하는 방법에는 여러 가지가 있습니다. 다음과 같이 분류 할 수 있습니다..

혈청 내 포도당 측정 방법

- 끝점 포토 메트릭

- 반사 광도 측정-건식 화학

처음 두 가지 방법은 매우 불편하고 독성이 있으며 정확도가 낮기 때문에 우리는 그것에 대해 생각하지 않을 것입니다..

포도당 산화 효소법

오늘날 가장 일반적인 방법은 포도당 산화 효소 인 효소를 사용하는 것입니다. 이 방법은 다음 반응을 기반으로합니다.

포도당 산화 효소는 포도당의 첫 번째 탄소 원자에서 액체 시약에 용해 된 산소로 두 개의 수소 원자를 전달하는 것을 촉매합니다. 이 경우 반응 중에 과산화수소가 등 몰량으로 형성됩니다. 그. 형성된 과산화수소의 농도는 결정된 포도당 농도와 정확히 동일합니다. 따라서 포도당 산화 효소 반응의 사용은 포도당 농도를 결정하는 문제를 과산화수소 농도를 결정하는 문제로 바꾸어 놓았으며, 이는 아래에서 볼 수 있듯이 첫 번째 것보다 훨씬 간단합니다. 그리고 여기에는 오늘날 실험실에서 널리 사용되는 몇 가지 방법이 있습니다 (다이어그램 참조)..

위의 등록 방법 중 가장 널리 퍼진 것은 광도계 생화학 적 방법으로, 퍼 옥시다아제 효소의 작용하에 과산화수소 분자가 절단되어 활성 산소 형태-슈퍼 옥사이드 음이온 라디칼-O2 -, 이는 차례로 발 색체를 산화시켜 발 색체의 흡수 스펙트럼에 상당한 변화를 가져옵니다..

그림에서. 1과 2는 표준 포도당 용액을 첨가하기 전후의 작업 용액의 스펙트럼을 보여줍니다. 반응 혼합물의 최대 흡수-(시약 + 포도당)은 500nm 영역에 있습니다. 따라서 480-520 nm 파장에서 최종 반응의 광학 밀도 변화는 시료에 포함 된 포도당 농도에 비례합니다..

그림 1. 작업 솔루션의 스펙트럼

그림 2. 반응 혼합물의 스펙트럼 (작동 용액 + 포도당)

포도당을 결정하는이 방법의 큰 인기는 높은 특이성과 구현 용이성 때문입니다. 이 방법은 기존 광도계 (Mikrolab 540과 같은 특수 생화학 광도계보다 우수)를 사용하고 자동 생화학 적 자동 분석기를 사용하여 구현할 수 있습니다..

몇 년 전 종점 측광 법과 함께 운동 측광 법이 구현 된 키트가 등장했습니다. 이 방법의 본질은 포도당 산화 효소와 과산화 효소 활성의 특정 비율에서 샘플을 작업 용액에 도입 한 후 일정 시간 동안 착색 화합물의 형성 속도가 샘플의 포도당 농도에 비례한다는 것입니다. 이 방법의 장점은 후자의 흡수가 시간이 지남에 따라 안정적이기 때문에 결과가 샘플의 다른 화합물의 존재에 의존하지 않는다는 것입니다. 이 방법에는 Stat Fax 1904+, Stat Fax 3300과 같은 운동 광도계, Clima 15와 같은 반자동 분석기 또는 자동 생화학 분석기를 사용해야합니다. 특수 효소 센서를 사용하여 전류 측정 원리를 기반으로 작동하는 장치를 사용하여 전혈에서 포도당 농도를 측정하는 것이 편리합니다. 과산화수소는 매우 불안정한 화학 물질이며 하전 입자의 공급원 역할을 할 수 있습니다. 이것은 휴대용 혈당 측정기의 막형 효소 센서 또는 전기 화학 셀에 사용되는 것입니다..

그림 3. 측정 셀

flow-through로 설계된 측정 셀에는 효소 막으로 한쪽에 경계가있는 측정 챔버가 있습니다 (그림 3). 포도당 산화 효소는 약 60 미크론 두께의 멤브레인에 특별히 흡착됩니다. 멤브레인의 다른쪽에 백금 전극이 눌러져 있습니다..

전혈 샘플 (일반적으로 20 μL)을 전신 완충 식염수 (적혈구가 파괴됨)로 희석 한 다음 플로우 셀로 파이프합니다. 포도당은 막에 위치한 효소 포도당 산화 효소의 영향으로 산화됩니다. 생성 된 과산화수소는 막을 통해 확산되고 백금의 작용하에 촉매 반응에서 추가로 산화됩니다. 백금 표면에 과산화수소가 확산되면 H 분자 수에 비례하는 전류가 형성됩니다.22. 이러한 방식으로 얻은 신호는 장치에 의해 해당 전압 값으로 처리됩니다. 이 측정 값은 샘플의 포도당 농도에 비례합니다..

위의 방법을 사용하는 장치의 예로 자동 포도당 분석기 Biosen (독일)의 이름을 지정할 수 있습니다. 이 장치는 병원뿐만 아니라 포도당 분석이 주로 모세 혈관에서 수행되는 폴리 클리닉에서 사용하기에 편리합니다..

임상 실험실 진단 방법 개발의 중요한 단계는 "건식 화학"의 출현이었습니다. 당연히이 기술의 첫 번째 응용 프로그램 중 하나는 환자의 혈액에서 포도당을 결정하는 문제였습니다. 최초의 기기는 기존의 실험실 연구 방법보다 정확도가 현저히 떨어졌습니다. 그러나 시간이 지남에 따라 많은 회사에서 이러한 진단 스트립과 반사 광도계를 개발하여 매우 높은 분석 정확도를 보장했습니다. 현재 Life Scan (USA)에서 제조 한 One Touch 혈당 측정기 및 테스트 스트립은 전 세계적으로 널리 보급되어 있으며, 정량 효소 분석법의 분석 정확도와 "건식 화학"의 속도 및 단순성을 성공적으로 결합했습니다..

One Touch 측정기는 전 혈당을 빠르고 정확하게 측정하도록 설계되었습니다. One Touch Test Strip에는 고유 한 다공성 친수성 막에 흡착되는 효소 인 포도당 산화 효소 및 과산화 효소를 포함하여 2 단계 포도당 산화 효소 방법에 필요한 모든 화학 물질이 포함되어 있습니다. 반응의 결과는 착색 된 복합체의 형성입니다. 현상 된 색상의 강도는 반사 형 미니 광도계로 기록됩니다..

그림 4. 테스트 스트립 디자인

또한, 멤브레인은 친수성 특성을 가지고있어 터치시 혈액 방울이 테스트 스트립 표면으로 "유인"될 수 있습니다. One Touch 테스트 스트립의 멤브레인은 미세한 기공이있는 스펀지와 유사하며 3 중 기능을 가지고 있습니다. 그것은 1) 저장소로, 필요한 양의 혈액을 수집하고, 2) 필터로, 고체 세포 물질 (적혈구, 백혈구 등)을 차단하고, 3) 반사광이 측정되는 매끄러운 광학 표면으로 작용합니다. 특히 후자의 기능은 장치 작동에 매우 중요합니다. 혈액이 테스트 스트립의 상단에 남아있는 동안 스트립의 하단을 읽을 수 있습니다. 따라서 검사지 표면의 혈액을 씻을 필요가 없습니다..

One Touch에는 2 개의 전용 LED가 장착되어 있습니다. 테스트 스트립에 현상 된 색상의 처리는 다음과 같습니다. 테스트 스트립을 미터에 삽입하면 0 점 판독이 발생합니다. 이 순간 디스플레이에 "WAIT"가 표시됩니다. 테스트 스트립에 혈액 한 방울을 적용하면 혈장은 즉시 막에 흡수되고 적혈구와 과잉 혈장은 막 표면에 남아 있습니다. 한 방울의 피가 완전히 흡수되면 즉시 얼룩이 발생합니다. 장치는 반사의 변화를 등록하고 자동으로 타이머를 시작합니다. 45 초 후 화학 반응이 종료되고 빛의 반사 결과가 처리됩니다. 유색 반응 생성물은 첫 번째 LED에서 방출되는 빛을 흡수합니다. 혈액 세포와 과잉 혈장은 또한 다이오드에서 방출되는 빛을 흡수합니다. 배경 반사를 수정하기 위해 다른 파장의 두 번째 LED를 사용하여 두 번째 판독이 이루어집니다. 첫 번째와 두 번째 LED의 신호 차이는 발 색체에 의한 빛의 흡수에 대한 정보를 전달합니다. 포도당 농도를 추정하기 위해 발색 체로부터 수신 된 신호는 특수 보정과 관련이 있습니다. 모든 One Touch 장치는 실험실 포도당 분석기에서 참조 방법을 사용하여 보정됩니다. 이 절차는 표준 교정 곡선을 생성합니다. 시약의 농도가 매우 낮기 때문에 화학적으로 완전히 동일한 테스트 스트립을 생산하는 것은 매우 어렵습니다. 이 문제를 해결하기 위해 16 개의 교정 라인으로 구성된 표준 교정 곡선이 사용됩니다. 품질 관리는 테스트 스트립 생산 직후에 수행되므로 주어진 테스트 스트립에 적용 할 수있는 교정 라인 (1 ~ 16)을 결정할 수 있습니다. 이것은 테스트 스트립의 포장에있는 소위 코드 번호입니다. 이 16 개의 교정 라인은 기기의 마이크로 프로세서에도 프로그래밍됩니다. 최적의 정확한 결과를 위해 테스트 스트립 포장의 코드 번호는 코드 버튼을 사용하여 미터에 설정됩니다. 따라서 장치에 잘못 설정된 코드로 인해 측정 오류가 발생할 수 있습니다..

One Touch 장치가 출시 된 이후 러시아, 미국 및 유럽의 실험실에서 많은 임상 시험이 수행되었습니다. 이러한 연구 중 하나는 러시아 의학 실험실 진단 협회가 의뢰 한 러시아 의학 아카데미의 내분비 연구 센터에서 수행되었습니다. 센터의 전문가들은 혈당 수치를 측정하는 두 가지 방법을 비교 분석했습니다. One Touch에서 얻은 결과는 포도당 측정을위한 hexokinase 방법을 구현하는 Spectrum II 생화학 분석기 (Abbott Laboratories, USA)에서 얻은 데이터와 비교되었습니다. 95 명의 환자로부터 190 개의 혈액 샘플을 검사했습니다. 결과의 상관 계수는 0.98641이었다. 원터치 측정기의 정상 및 병리 범위의 변동 계수가 2.5 %를 초과하지 않았습니다..

그림: 5. "원터치"및 "스펙트럼 -2"판독 값의 상관 관계 (상관 계수 0.98641)

결론적으로 포도당 산화 효소법의 단점을 언급해야한다. 생성 된 과산화수소 및 슈퍼 옥사이드 라디칼 음이온은 크로 모겐뿐만 아니라 생물학적 유체에 존재하는 다른 물질 (아스코르브 산, 요산, 빌리루빈)도 산화시킬 수 있습니다. 이 경우 발색 원의 산화에 관여하는 과산화물의 비율이 감소하여 포도당 결과가 과소 평가됩니다. 이 방법은 선형이며 일반적으로 최대 20-30 mmol / L 포도당입니다. 러시아 의학 아카데미의 내분비 연구 센터의 공식 보고서에 따르면“원터치 장치는 높은 정확도와 정확도를 제공 할뿐만 아니라 넓은 측정 범위를 제공합니다. 구급차 팀을 포함하여 당뇨병의 응급 상황을 진단하는 데 사용할 수 있습니다. 이러한 장치는 신뢰할 수있을뿐만 아니라 빠른 결과를 제공하기 때문입니다. ".

Hexokinase 방법

등록은 NADH의 광 흡수에 의해 340nm의 파장에서 수행됩니다. 이 방법은 매우 특이하며 혈청의 다른 성분과 반응하지 않습니다. 헥소 키나제 방법은 포도당 측정을위한 기준 방법으로 간주됩니다. 일반적으로 최대 50mmol / L의 선형이므로 내분비과가있는 클리닉에 널리 권장됩니다..

설명 된 다양한 포도당 측정 방법에서 CDL 직원은 어떤 결정 방법과 어떤 장치를 선택할지 스스로 결정할 수 있습니다.

  • 자동 생화학 분석기에 구현 된 "습식"생화학 방법은 분석 흐름이 많은 실험실의 요구를 충족합니다..
  • Biosen 포도당 분석기는 완전히 자동화되고 매우 생산적이기 때문에 작업자의 노동력이 최소화됩니다 (시간당 50 ~ 200 개 샘플 속도)..
  • 연구 수가 적은 실험실과 특급 실험실의 경우 특수 생화학 광도계 Mikrolab 540이 편리합니다..
  • 응급 팀의 경우 이상적인 솔루션은 One Touch 혈당 측정기입니다..

따라서, CDL의 작업은 빠르고 정확한 포도당 측정을 제공하는 것이 오늘날 상당히 해결 가능합니다..

효소 적 방법에 의한 혈액 내 포도당 측정

혈액 내 모든 가용성 저 분자량 탄수화물의 90 % 이상이 포도당이며, 또한 과당과 오탄당이 소량으로 존재할 수 있으며 병리학 및 갈락토스에 존재할 수 있습니다.

포도당은 혈장과 적혈구 사이에 거의 균등하게 분포하므로 전혈, 혈장 및 혈청에서 검출 할 수 있습니다. 정상적인 혈중 농도는 3.3-5.5mM / L입니다. 생리적 조건 하에서 풍부한 탄수화물 음식, 생리적 스트레스, 강한 감정 후 혈액에서 증가 할 수 있습니다..

고혈당증은 당뇨병, 췌장염, 외상 및 뇌진탕, 뇌염, 낭포 성 섬유증, 정신적 동요, 일산화탄소 중독, 수은과 같은 많은 병리학 적 상태에서 관찰됩니다. 당뇨병의 중증도에 따라 공복 혈당 수준은 다음과 같습니다. 경미한 정도-6.7-7.8 mM / l.

저혈당증은 인슐린 과다 복용, 췌장 질환, 악성 질환, 일부 전염성 및 독성 간 손상, 갑상선 기능 저하증, 효소 결핍과 관련된 유전성 질환으로 발생합니다..

포도 당뇨는 당뇨병, 부신 증식, 신장 기능 장애, 패혈증, 외상 및 뇌종양, 모르핀 중독, 췌장염, 판 코니 증후군에서 나타납니다..

단일 포도당 부하는 당뇨병 환자의 혈당 곡선을 천천히 증가시키는 반면, 저혈당 단계는 일반적으로 감지되지 않으며 곡선의 감소는 매우 느립니다. 설탕은 소변에서도 결정됩니다..

당뇨병의 현대 진단에서 기준은 공복 혈당이 최대 7, 0 mM / L까지 증가하는 것이며, 내당능 장애를 감지하기 위해 테스트가 수행됩니다. 검사는 당 부하로 수행되며, 200-300ml의 물에 용해 된 75g의 포도당을 섭취 한 후 공복 혈당 수준을 검사합니다. 포도당 측정을위한 핑거 스틱은 2 시간 동안 30 분마다 취합니다. 당화 헤모글로빈을 결정하기위한 검사도 수행됩니다. 혈액에서 포도당은 적혈구 내부의 헤모글로빈 분자 (HbAIc)에 결합합니다. 헤모글로빈 분자에 결합 된 포도당 입자의 수는 적혈구가 90 일 동안 살기 때문에 혈액 내 포도당 농도와 직접 관련이 있습니다. 당화 혈색소 분석에 따르면 포도당 농도는 3 개월 만에 설정 될 수 있습니다. 특정 수준에서 5 % 증가하면 보상이 잘된 당뇨병, 10 %-부분 보상 된 당뇨병, 12 % 이상-보상되지 않은 당뇨병.

당뇨병 진단을 위해 인슐린과 C- 펩티드의 농도를 결정하는 것도 중요합니다. 프리 인슐린 분자는 A와 B 사슬을 연결하는 31 개의 아미노산으로 구성된 C- 펩티드를 포함합니다. 인슐린 합성 과정에서 펩 티다 제에 의해 절단되고 인슐린과 함께 혈류로 들어갑니다. 인슐린은 펩티드가 절단 될 때까지 비활성입니다. 이것은 췌장이 인슐린을 저장하도록합니다. C- 펩티드와 인슐린은 동일한 양으로 방출되므로 인슐린 분비는 C- 펩티드에 의해 추정 될 수 있습니다. 그러나 혈류에서 이러한 물질을 제거하는 속도가 다르다는 것을 알아야합니다. C- 펩티드는 인슐린보다 혈액에 오래 머무르며 인슐린보다 5 배 더 안정적입니다. 건강한 사람들의 경우 C- 펩티드는 1-4 ng / ml, 인슐린은 6-27mU / ml입니다. C- 펩티드 수치의 증가는 B- 세포 비대, 인슐린 비 의존성 당뇨병 (NIDDM)을 나타낼 수 있습니다. 인슐린 의존성 당뇨병 (IDDM)에서 C- 펩티드의 감소가 관찰 됨.

당뇨병 진단에는 소변의 알부민 농도 결정이 사용됩니다. 건강한 사람들의 매일 소변에서 최대 8mg의 단백질을 찾을 수 있습니다. 당뇨병에서 단백질은 20-300mg / l로 상승합니다..

당뇨병 위험에 대한 추가 기준은 지질 대사의 정의입니다. 혈당 증가와 병행하여 혈중 중성 지방 수치 변화.

포도당을 결정하는 방법은 세 그룹으로 나뉩니다.

농축산으로 탄수화물을 가열 할 때 생성되는 생성물을 포함하는 색 반응을 사용하는 방법.

효소 연구 방법은 높은 정확도를 결합하며 헥소 키나아제 또는 글루코 옥시다아제의 두 가지 반응 중 하나를 기반으로합니다. 헥소 키나아제에서 포도당은 먼저 헥소 키나아제의 작용으로 인해 ATP에 의해 인산화됩니다. 글루코스 -6- 포스페이트 탈수소 효소의 존재하에 생성 된 글루코스 -6- 포스페이트 에스테르는 NADP를 감소시키고, 그 양은 자외선 영역의 광 흡수 증가에 의해 결정됨.

포도당 산화 효소 방법은 수행하기가 더 쉽습니다. 포도당 산화 효소가 대기 중 산소로 포도당을 산화시켜 과산화수소를 형성하며, 그 양은 화학적으로 또는 과산화 효소 존재 하에서 유색 생성물의 형성과 함께 디아민을 산화시키는 능력에 의해 결정됩니다.

방법 원리 : 포도당 산화 효소는 과산화수소의 형성으로 포도당을 산화시키고, 과산화 효소의 작용으로 오르토 톨 리딘을 산화시켜 청색 염색체를 형성합니다..

시약 :

1. 염화나트륨 9g / l (물 100ml 중 0.9g NaCl).

2. 황산 아연, 50g / l : 황산 아연 5g을 물에 녹이고 부피를 100ml로 조정.

3. 수산화 나트륨, 0.3mol / l : 1.2 NaOH를 100ml의 물에 용해시켜 제조.

4. 오르토 톨 리딘, 1 % 용액 : 약물 1g을 100ml의 절대 알코올에 녹입니다..

5. 아세테이트 완충액 pH 4.8 : 0.25N 아세트산 4 부와 0.25N 아세트산 나트륨 6 부 혼합.

7. 양 고추 냉이 과산화 효소.

8. 작업 시약 80ml의 아세테이트 완충액에 포도당 산화 효소 2mg과 과산화 효소 1mg을 녹이고 1 % 오르토 톨 리딘 용액 1ml를 가한 다음 완충액과 혼합하여 부피를 100ml로 조정합니다..

9. 포도당 교정 용액. 먼저, 농도가 50mmol / l 인 저장 용액을 준비하고 포도당 180mg을 벤조산 20ml에 용해시킵니다. 작업 교정 용액은 다음을 포함하는이 용액에서 준비됩니다. 3 mmol / l; 6mmol / l; 9mmol / l; 12mmol / l; 15mmol / l; 18mmol / l; 21 mmol / l, 0.6ml를 섭취하십시오. 1.2ml; 1.8ml; 2.4ml; 3.6ml; 4.2ml의 스톡 용액과 포화 벤조산 용액으로 10ml까지 만든다. 이 용액에는 혈액과 동일한 농도의 포도당이 포함되어 있습니다..

결정 : 1.1ml의 염화나트륨, 0.4ml의 황산 아연 용액 및 0.4ml의 0.3N NaOH 용액을 원심 분리 튜브에 첨가하고 혼합한다. 이 경우 산화 아연 수화물의 매우 얇은 겔이 형성되고 0.1 ml의 혈액 또는 보정 용액이 방출되고 혼합물을 교반하고 10 분 후에. 3000rpm에서 10 분 동안 원심 분리.

상청액 1ml에 작동 시약 3ml를 넣고 부드럽게 섞는다. 15 분 후, 작업 샘플과 동시에 설정되는 블랭크 실험에 대해 적색 필터 (625nm)를 사용하여 광학 경로 길이가 1cm 인 큐벳에서 색상이 전개되고 측광되지만 혈액 대신 염화나트륨의 생리적 용액이 사용됩니다. 교정 그래프 작성시 혈액 샘플 대신 해당 교정 용액 0.1ml를 채취합니다..

공복시 정상 값 : 3.5-5.7 mmol / L (100 ml에서 60-100 mg).

혈당

혈액 내 포도당 측정은 임상 실험실 진단에서 가장 널리 사용되는 검사 중 하나입니다. 포도당은 혈장, 혈청, 전혈에서 결정됩니다. 미국 당뇨병 협회 (2011) 당뇨병 실험실 진단 지침에 따르면 혈장을 사용하여 혈전이 형성 될 때까지 기다리지 않고 해당 과정을 예방하기 위해 신속하게 원심 분리하는 혈장을 사용하므로 당뇨병 진단시 혈청 포도당을 측정하지 않는 것이 좋습니다..

전혈과 혈장의 포도당 농도 차이는 결과 해석에 특별한주의가 필요합니다. 혈장 포도당 농도는 전혈보다 높고 그 차이는 헤마토크리트 값에 따라 다르므로 일정한 계수를 사용하여 혈당과 혈장 수준을 비교하면 잘못된 결과가 발생할 수 있습니다. WHO 권고 (2006)에 따르면 포도당 농도를 결정하는 표준 방법은 정맥혈 혈장 내 포도당을 결정하는 방법이어야합니다. 정맥혈과 모세 혈의 혈장 내 포도당 농도는 공복시 차이가 없지만 포도당 부하 2 시간 후 차이가 큽니다 (표)..

포도당 농도, mmol / l
전혈혈장
정맥모세관정맥모세관
표준
공복에3.3-5.53.3-5.54.0-6.14.0-6.1
OGTT 후 2 시간6.7 7.8 7.8 8.9 6.1> 6.1> 7.0> 7.0
OGTT 후 2 시간> 10.0> 11.1> 11.1> 12.2

생물학적 샘플의 포도당 수준은 저장에 따라 크게 영향을받습니다. 샘플을 실온에 보관하면 해당 과정으로 인해 포도당 함량이 크게 감소합니다. 불화 나트륨 (NaF)은 해당 과정을 억제하고 포도당 수치를 안정화하기 위해 혈액 샘플에 첨가됩니다. WHO 전문가 보고서 (2006)에 따르면 혈액 샘플을 채취 할 때 즉각적인 혈장 분리가 불가능한 경우 전혈 샘플을 해당 과정 억제제가 들어있는 튜브에 넣어야하며, 혈장 분리 또는 분석까지 얼음에 보관해야합니다..

연구 표시

  • DM의 진단 및 모니터링;
  • 내분비 계통의 질병 (갑상선, 부신, 뇌하수체의 병리학);
  • 간 질환;
  • 비만;
  • 임신.

샘플 채취 및 보관의 특징. 연구 전에 정신-정서적 및 신체적 스트레스 증가를 배제 할 필요가 있습니다..

바람직하게는-정맥 혈장. 용혈을 방지하기 위해 채혈 후 30 분 이내에 형성된 요소에서 샘플을 분리해야합니다..

샘플은 2-8 ° C에서 24 시간 이상 안정적입니다..

연구 방법. 현재 포도당 농도를 결정하는 효소 적 방법 인 헥소 키나제 및 포도당 산화 효소는 실험실에서 가장 널리 사용됩니다..

증가 된 가치

  • SD 1 또는 2 유형;
  • 임신 당뇨병;
  • 내분비 계 질환 (말단 비대, 갈색 세포종, 쿠싱 증후군, 갑상선 중독증, 포도당 형성 종);
  • 혈색소 침착증;
  • 급성 및 만성 췌장염;
  • 심장 성 쇼크;
  • 만성 간 및 신장 질환;
  • 운동, 강한 정서적 스트레스, 스트레스.

감소 된 값

  • 당뇨병 환자의 인슐린 또는 저혈당 약물 과다 복용;
  • 인슐린 합성 장애를 유발하는 췌장 질환 (비대증, 종양);
  • 금기 사항으로 인한 호르몬 결핍;
  • 글리코겐 증;
  • 종양학 질병;
  • 심한 간부전, 중독으로 인한 간 손상;
  • 탄수화물 흡수를 방해하는 위장병.
  • 대주;
  • 격렬한 신체 활동, 발열 상태.

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1. 혈청 내 포도당의 효소 적 측정 방법

원리 : 포도당 산화 효소 효소의 존재하에 포도당은 대기 산소에 의해 산화되어 과산화수소를 형성하며, 페놀과 p- 아미노 안티피린의 과산화 효소 축합의 영향으로 착색 된 화합물로 파괴됩니다. 색상 강도는 포도당 농도에 비례합니다..

.시약, 테스트 재료 1. 작동 시약. 2. 표준 포도당 용액. 3. 테스트 혈청 포도당 농도는 다음 공식에 의해 계산됩니다. )

정상 혈당 농도는 3.65-6.11 mmol / l입니다..

진단 값 :

6.11 mmol / L 이상의 혈당 증가를 고혈당증이라고합니다. 고혈당증에는 두 가지 그룹이 있습니다. 1. Insular-신체의 인슐린 부족 또는 그 작용의 비 효율성 (당뇨병)과 관련이 있습니다. 2. Extrainsular-인슐린의 영향과 무관 :-갑상선 (갑상선 기능 항진증), 부신 (갈색 세포종), 뇌하수체의 호르몬 기능 증가. -확산 간 손상. -중추 신경계에 대한 기계적 및 독성 손상. -외상 및 뇌종양. -간질. -강한 감정적 스트레스.

외계 고혈당증의 형성에서 가장 중요한 과정은 다음과 같습니다.-글리코겐 분해 증가. -포도당 생성 증가. -글리코겐 합성 억제. -호르몬의 영향으로 포도당 이용률 감소-인슐린 길항제.

저혈당증

이 상태는 전 혈당이 2.2mmol / L 미만이고, 효소법으로 혈청에서 측정했을 때 2.5mmol / L 미만일 때 발생하는 것으로 여겨집니다..

저혈당증의 증상은 과도한 아드레날린 분비와 중추 신경계 기능 장애로 인해 발생할 수 있습니다. 포도당은 뇌의 중요한 에너지 원료이기 때문에 저혈당증은 위험합니다. 발달 메커니즘에 따라 저혈당증의 원인은 세 그룹으로 나눌 수 있습니다. 1. 감소 된 포도당 출력. 2. 증가 된 포도당 이용. 3. 감소 된 수확량 및 증가 된 포도당 이용.

2. 뷰렛 법에 의한 혈청 내 총 단백질 측정

방법 원리 : 정량적 방법은 뷰렛 반응을 기반으로합니다. 알칼리성 매질에서 구리 이온은 단백질과 함께 보라색 복합 화합물을 형성합니다. 용액의 색상 강도는 광도 측정으로 측정되는 단백질 농도에 비례합니다..

시약, 시험 재료 :

Biuret 시약 (작동 시약).

2. 표준 단백질 용액.

3. 혈청.

총 단백질의 농도는 다음 공식으로 계산됩니다. Con = (Eon * Cst) / Est (1은 테스트 샘플의 총 단백질 농도, 2는 테스트 샘플의 광학 밀도, 3은 표준 샘플의 총 단백질 농도, 4는 표준 샘플의 광학 밀도)

성인의 정상적인 총 혈액 단백질 농도는 65-85g l, 어린이는 56-85g l입니다.

진단 값 : 인간의 혈장은 일반적으로 100 가지 이상의 단백질을 포함합니다. 총 단백질의 약 90 %는 알부민, 면역 글로불린, 지단백질, 피브리노겐, 트랜스페린입니다. 다른 단백질은 훨씬 적은 양으로 혈장에 존재합니다..

혈액 내 총 단백질 농도의 감소를 각각 저 단백 혈증이라고하고 증가를 저 단백 혈증이라고합니다..

저 단백 혈증의 원인은 다음과 같습니다.

1. 영양소 요인 (즉, 음식에서 단백질 섭취 부족) : 기아, 모든 종류의식이 요법 및 식도 협착증, 유문 위 협착과 같은 질병과 관련된 영양 실조.

2. 위장관의 다양한 질병으로 인한 단백질 소화 불량, 예 : 만성 장염;

3. 단백질 생합성 위반; 간염, 간경변, 심한 중독, 개별 단백질 합성의 선천성 장애-analbuminemia, Wilson-Konovalov 질병.

4. 혈액 내 단백질 손실 (급성 및 만성 출혈) 및 소변 (신 증후군).

5. 다른 조직으로의 단백질 전달은 부종의 형성, 소위 세 번째 공간으로의 전이입니다 (삼출액은 장내 강으로, 화상 표면으로.

6. 신체의 단백질 분해 증가; 종양, 갑상선 기능 증가, 항상 장폐색과 함께 발생.

7. 단백질 농도의 생리적 감소 (예 : 임신 말기 및 수유기).

순환 액의 부피가 증가하면 총 단백질 농도의 상대적인 감소가 관찰 될 수 있습니다 : 정맥 내 유체의 대량 도입, 중단 또는 이뇨의 급격한 감소; 시상 하부의 항 이뇨 호르몬 과다 생산, 심장 부전.

고단백 혈증은 드뭅니다. 골수종, 만성 다발성 관절염 및 장기간의 염증 과정에서 절대 고단백 혈증 (즉, 수분 균형 위반과 관련이 없음)이 관찰됩니다. 상대적 (즉, 순환 액의 양 감소로 인해 발생)-심한 화상, 복막염, 불굴의 구토 및 설사, 요붕증, 장폐색, 만성 신부전, 발한 증가.

일부 질병, 특히 장 폐쇄, 확산 성 복막염, 생화학 적 혈액 검사에서 발견되는 상대적인 고단백 혈증이이 병리의 특징 인 단백질 결핍을 가린다는 점을 기억해야합니다..

저 단백 혈증은 거의 항상 저 알부민 혈증과 관련이 있으며 고단백 혈증은 거의 항상 고 글로불린 혈증과 관련이 있습니다.

효소 적 방법에 의한 혈액 내 포도당 측정

제약 및 임상 진단

우리는 Glucose FKD 및 Cholesterol FKD 시약 키트를 생산합니다.

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모스크바, st. Malaya Yushunskaya, d. 1에서. 1

포도당 FKD에 대한 지침

부서의 머리
상태 제어
의약품 및
의학 기술
러시아 보건부.

시약 키트 사용
포도당 함량의 광도 측정 용
효소 적 방법에 의한 혈청 또는 혈장

러시아 보건부의 신 의료 기술위원회의 실험실 시약에 대한 전문가위원회의 승인 권장 (1997 년 10 월 27 일자 프로토콜 번호 7)

이 키트는 임상 진단 및 생화학 실험실 및 연구 실습에서 포도당 산화 효소 방법에 의한 인간 혈청 또는 혈장 내 포도당 정량 측정을위한 것입니다..

이 키트는 한 번의 분석을 위해 2.0ml의 효소-색소 혼합물 용액을 소비하여 50 회 측정하도록 설계되었습니다..

b-D-포도당을 대기 중 산소로 산화시키는 동안 포도당 산화 효소의 작용으로 동 몰량의 과산화수소가 형성됩니다. 과산화 효소의 작용하에 과산화수소는 페놀 화합물의 존재 하에서 발색 기질을 산화시켜 착색 된 생성물을 형성하며, 그 색상 강도는 분석 된 샘플의 포도당 농도에 정비례하며 파장 500 (490-540) nm에서 측광 측정됩니다..

-효소 발색성 혼합물, 정제, 인산 칼륨 완충제, 페놀 함유 발색 원, 4- 아미노 안티피린, 안정제, 포도당 산화 효소 (1500 U) 및 과산화 효소 (1100 U)-1 정;

-교정기 (10 mmol / l 농도의 포도당 교정 용액)-1 병;

-항응고제 (0.1 mol / l 구연산 나트륨)-1 정.

키트의 분석적 특성.

포도당 농도 범위의 선형성에서 2에서
20mmol / l는 5 %를 초과하지 않습니다. 감도-1 mmol / L 이하. 변동 계수-5 % 이하.

결정의 정확성을 확인하려면이 방법으로 인증 된 국내 또는 해외 대조 혈청을 사용하는 것이 좋습니다. 인간 혈청 또는 혈장의 포도당 함량은 정상 4.2-6.1 mmol / l입니다..

각 실험실에서 연구 대상 집단의 규범 값을 명확히하는 것이 좋습니다..

효소 발색성 혼합물에는 독성 성분이 포함되어 있습니다. 그것으로 작업 할 때 피부 및 점막과의 접촉을 피하기 위해주의를 기울여야합니다. 효소-색소 성 혼합물을 섭취 한 경우, 다량의 흐르는 물로 감염된 부위를 씻으십시오..

일할 때는 일회용 고무 또는 플라스틱 장갑을 착용해야합니다. 인간 혈액 샘플은 감염 가능성이 있고 HIV, B 형 간염 바이러스 또는 기타 바이러스 감염의 원인이 될 수있는 바이러스를 장기간 저장할 수있는 가능성이있는 것으로 간주되어야합니다..

예방 조치- "소련 보건부 시스템의 위생 및 역학 기관 실험실 (부서, 부서)에서 작업 할 때 장치, 안전, 산업 위생, 전염병 방지 체제 및 개인 위생에 대한 규칙", 모스크바, 1981 년 준수.

키트로 작업 할 때 사용되는 화학 용기 및 장비는 적절하게 라벨을 부착하고 별도로 보관해야합니다..

키트 작업을위한 방에서 식사, 화장품 및 흡연을 금지합니다..

용혈되지 않은 인간 혈청 또는 혈장.

혈청은 일반적인 방법으로 얻습니다..

혈장은 다음과 같이 얻습니다. 항응고제를 증류수 50ml에 넣고 완전히 녹을 때까지 잘 섞는다. 결과 용액은 + 2-8 ° С의 온도에서 7 일 이상 보관할 수 없습니다. 원심 분리기 튜브에 혈액 0.1ml를 넣고 항응고제 용액 0.9ml를 넣고 잘 섞어 실온 (+ 18-25 ° C)에서 15 분 동안 3000g에서 원심 분리합니다. 생성 된 상층 액을 깨끗한 튜브로 옮기고 분석에 사용.

최대 324 μmol / L의 빌리루빈 함량은 포도당 측정의 정확도에 영향을주지 않습니다..

장비 및 시약 :

-분광 광도계 또는 광전 열량계, 파장 500 (490-540) nm, 광학 경로 길이가 5 또는 10 mm 인 큐벳, 자동 또는 반자동 생화학 분석기

-온도를 +37 ± 1 ° C로 유지하는 물 온도 조절기;

-교체 가능한 팁이있는 반자동 단일 채널 피펫으로 0.025 액체 부피를 사용할 수 있습니다. 0.1; 0.25; 0.9 및 2.0 ml;

-스톱워치 또는 타이머 (시계)

-용량 100ml의 부피 플라스크;

-10ml 용량의 유리 시험관;

분석 준비.

효소 발색 혼합물 용액의 준비.

100ml 용량의 부피 플라스크에 효소-색소 혼합물 정제를 넣고 70ml의 증류수를 넣고 정제가 완전히 녹을 때까지 잘 섞은 다음 증류수로 표시합니다. 효소-발색성 혼합물의 결과 용액은 병이 충분히 밀봉 된 경우 어두운 유리 접시에 + 2-8 ° C의 온도에서 3 일 이하 동안 보관할 수 있습니다..

혈청 포도당 측정.

다음 체계에 따라 분석 된 혈청 샘플 및 시약을 튜브에 추가합니다.

포도당 측정을위한 포도당 산화 효소 방법

인체의 다양한 체액에서 독점적으로 포도당 농도를 결정하기 위해 포도당 산화 효소 방법이 사용됩니다. 이 테스트의 장점은 정확성입니다. 표현 방법과 달리 진단을 사용하면 과당 및 기타 설탕을 첨가하지 않고도 순수한 포도당의 양을 확인할 수 있습니다. 이 반응의 원리는 산화제와 특정 염료의 상호 작용으로 인해 발생하는 용액의 착색입니다. 연구 결과 평가는 비색법 및 표준 용액과의 비교를 사용하여 수행됩니다..

포도당 산화 효소법이 처방되었을 때?

이 검사는 내당능 장애와 당뇨병 전증의 발병 및 질병의 높이를 감지하는 데 사용됩니다. 그러나 이러한 목적으로 분석은 거의 사용되지 않으며 이는 높은 비용과 결과를 오래 기다려야하기 때문입니다. 대부분이 방법을 사용하여 혈액과 소변의 포도당 측정은 다음과 같은 질병의 감별 진단에 사용됩니다.

  • 유당 불내증 증후군;
  • 과당에 대한 편협함;
  • 체액으로 과당 배설;
  • 소변 내 오탄당 농도 증가.

포도당 산화 효소 검사의 확실한 장점은 정확성입니다..

이 방법의 기초는 무엇입니까?

혈중 포도당 농도를 결정하는 방법에는 여러 가지가 있지만 포도당 산화 효소가 가장 정확합니다. 그 근본적인 기초는 설탕이 대기 중 산소와 상호 작용할 때 시약이 산화된다는 것입니다. 과산화수소가 용액으로 방출됩니다. 이 물질은 오르토 톨루이딘과 상호 작용하여 착색 된 화합물을 형성합니다. 이 반응의 행동을 위해서는 특수 효소의 존재가 필요합니다. 산화 반응 동안 포도당 산화 효소가 존재해야하며 액체가 착색되면 과산화 효소가 존재해야합니다. 용액의 색상 강도는 포도당 함량에 따라 달라지며 높은 포도당 함량에서 가장 강합니다..

포도당 측정을위한 포도당 산화 효소 방법의 본질

결과는 같은 기간 후에 정량적 광도법을 사용하여 평가됩니다. 특정 선언 된 당율을 포함하는 보정 용액을 사용하는 것이 필수적이며, 그로부터 시작하여 분비 된 체액, 더 자주 혈액 내 포도당 농도를 판단 할 수 있습니다..

분석은 어떻게 수행됩니까??

재료는 빈속에 환자에게서 가져옵니다. 검사를 위해 정맥혈은 5ml의 양으로 사용됩니다. 진단 직전에 환자는 엄격한식이 요법을받습니다. 이를 통해 결과의 신뢰성을 판단하고 가능한 분석 오류를 배제 할 수 있습니다. 혈액을 채취하기 전 2 일 동안 환자는 술과 흡연의 나쁜 습관을 포기해야합니다. 또한 지나치게 단 음식의 섭취를 제한하고 가능하면 스트레스가 많은 상황을 피해야합니다..

대부분의 경우 포도당 농도를 결정하는이 방법은 모양 요소를 분리하는 데 사용되는 원심 분리 방법에 의해 수행됩니다. 설탕의 양은 이미 혈장에서 결정됩니다. 필요한 모든 시약을 첨가하면 상온에서 시험을한다면 20 분 후에 색이 관찰된다. 포도당은 보정 차트 또는 부분 규칙을 사용하여 계산됩니다..

연구 시약

설탕을 결정하려면 혈액 내 포도당을 결정하는 표현 방법을 사용하는 것이 가장 편리합니다. 이것은 사용의 용이성과 빠른 결과 때문입니다. 또한 환자는 실험실이나 병원에 갈 필요가 없습니다. 그러나 포도당 산화 효소 검사와 달리 이러한 진단은 신뢰할 수 없습니다. 포도당을 다른 당과 구별하지 않고 함께 농도를 결정하기 때문에.

포도당 산화 효소 반응의 기초는 염화나트륨 9 % 용액과 황산 아연 50 %입니다. 그들은 혈액 원심 분리 단계에서 추가됩니다. 또한 아세트산과 아세트산 나트륨을 포함한 완충 용액이 사용됩니다. 적정에 의해 pH는 4.8에서 결정됩니다. 그 후 포도당 산화 효소가 첨가되어 과산화수소와 과산화 효소가 방출되어 용액을 원하는 농도로 착색하여 정확한 결과를 얻습니다..

분석 기준

설탕의 양은 특수 단위로 측정됩니다-용액 리터당 밀리몰.

포도당 산화 효소 혈액 검사는 공복에서 수행해야하며이를 위해 혈장 또는 혈청을 사용합니다. 여성과 남성 모두 성인의 양은 3.3-5.5입니다. 15 세 미만 어린이의 경우이 수치는 약간 낮으며 3.2 ~ 5.3 범위입니다. 신생아의 혈당은 1.7-4.2입니다. 환자의 당뇨병 발병 또는 내당능 장애로 지표의 증가가 관찰됩니다. 이 상태는 당뇨병 전단계이며, 제때 치료하지 않으면 곧 심각한 병리가 발생하게됩니다..

혈당 측정

효소 적 비색계 법에 의한 혈중 글루코스 농도 측정.

효소 포도당 산화 효소의 작용하에 대기 산소에 의한 глюкD- 포도당의 산화 과정에서 등 몰량의 과산화수소가 형성됩니다. 과산화 효소의 작용으로 과산화수소는 발색 기질을 산화시켜 착색 된 제품을 형성합니다. 결과 용액의 색상 강도는 샘플의 포도당 농도에 비례합니다..

반응 혼합물을 완전히 혼합하고 37 ° C에서 15 분 동안 또는 18-25 ° C에서 25 분 동안 배양합니다. 배양 시작 후 5-10 분 동안 튜브를 세게 흔들어줍니다. 배양 종료 후, 490-540nm 파장에서 흡수층 두께가 5mm 인 큐벳의 빈 샘플에 대해 실험 및 보정 샘플의 광학 밀도를 측정합니다..

포도당 농도 계산은 다음 공식에 따라 수행됩니다.

C = ————— x 10, 여기서 Eo는 테스트 샘플의 광학 밀도입니다.

Ek Ek는 보정 샘플의 광학 밀도입니다.

교정기의 10- 포도당 농도.

1. 진단 테스트 스트립 "Glukofan", "Glucotest"를 사용하여 소변 내 포도당 정량 측정

테스트 원리 : 정의는 포도당 산화 효소와 과산화 효소를 사용하는 특정 효소 반응을 기반으로합니다. 포도당과 산소의 산화는 효소 포도당 산화 효소에 의해 촉매됩니다. 이 경우 글루코 소락 톤과 과산화수소가 형성되어 효소 과산화 효소에 의해 촉매 작용을받는 후속 반응에서 강렬한 색상의 생성물을 형성하여 발 색계를 산화시킵니다..

테스트-스트립을 테스트 소변에 담그고 즉시 제거합니다. 20-30 초 후 표시기 영역의 색상을 색상 스케일과 비교합니다.

단일 설탕로드 방법. 강의의 설탕 곡선은 분석 결과에 따라 분석됩니다. 환자에서 설탕 곡선을 구성 할 때 설탕 수준 (mmol / l)의 다음 역학이 관찰되었습니다.

설탕 곡선을 구성하고 각 경우에 대한 추정치를 제공합니다..

학습 과제

1. 소년은 왜 오랫동안 빵을 씹었을 때 입에서 달콤한 맛을 느꼈는지 물었습니다. 답 : 전분 가수 분해 과정에서 (타액 아밀라아제의 작용에 의해) 말토오스가 형성되어 단맛을냅니다.

2. 환자는 비경 구 치료를 위해 의사가 처방 한 일일 용량보다 10 배 더 많은 "페 로스"용량의 인슐린을 복용했습니다. 혈당 수치가 변합니까? 설명. 위장관의 인슐린이 개별 아미노산으로 가수 분해되기 때문에 포도당 반응은 변하지 않으므로 인슐린은 항상 비경 구적으로 투여됩니다

3. 소금없이 지은 요리는 맛이 없다. 소금을 첨가하면 생리적 의미가 있습니까, 아니면 맛이 좋습니까? Answer 음식에 소금을 첨가하면 아밀라아제 활성화 등 여러 가지 의미가 있습니다. NaCl은 isosteric activator이기 때문에 다른 의미는 소금을 첨가하면 장에서 수송 단백질이 활성화되어 포도당을 혈액으로 운반한다는 것입니다.

4. 피를 흘렸을 때 간호사는 아이를 진정시키지 않았고 큰 소리로 울고 손에서 힘겨워했습니다. 생화학 연구에 따르면 혈당이 크게 증가했습니다. 그러한 증가의 메커니즘을 설명하십시오.

연구에 근거하여 어린이의 당뇨병을 배제 할 수 있습니까? 아드레날린, cAMP 형성을 통해 글리코겐 포스 포 릴라 아제 활성화

(연쇄 활성화 메커니즘 연결) 글리코겐을 유리 포도당으로 파괴하면서 고혈당증을 유발합니다.

5. 실험에서 동물은 췌장 관 결찰을 받았다. 이것이 위장관의 탄수화물 소화에 영향을 미칠까요? 답변 : 췌장 주스에서 알파-아밀라아제가 생성되어 전분과 글리코겐의 덱스트린을 말토오스와 이소 말토오스로 가수 분해하므로 췌관이 결찰되면 탄수화물 소화가 방해받습니다

6. 일시적인 의식 상실, 잦은 코피, 발작을 동반 한 발작을 호소하여 4 세에 소아 병원에 입원 한 환자.

분석 결과 : 8 개월부터 일시적인 의식 상실과 경련을 동반 한 월간 공격이 기록되었습니다. 공격은 식사 전이나 이른 아침에 시작되었습니다. 1 년부터-잦은 코피. 외부 검사시 : 작은 키, 큰 배, 불균형 적으로 얇은 사지, 피부 출혈, "인형"얼굴, 간 비대.

실험실 테스트에서 : 혈당 2.9 mmol / l, 고유 산혈증, 고 중성 지방 혈증, 고요 산혈증. 글루카곤과 아드레날린 투여에 대한 고혈당 반응은 없습니다. 생화학 적 관점에서이 증상의 존재를 설명하십시오..

어떤 질병을 추정 할 수 있습니까? 가정을 확인하는 방법? 아이의 반응은 아마도 간 효소의 부재, 포도당 6 인산 가수 분해 효소, 지르 케병, 글리코겐은 분해되지 않고 합성 만하는 반면 간은 증가하고 근육의 글리코겐은 젖산으로 산화되고 그 함량이 증가하고 그 양이 GNG에 가장 많이 사용되지만 발생하지 않습니다. 동일한 효소가 글리코겐과 GNG의 분해를 담당하기 때문에 혈당이 증가하는 것은 포도당이 아니라 젖산 인 아드레날린의 도입으로 가정이 확인됩니다.

7. 환자는 식욕 증가와 과체중에 대한 불만으로 내분비 학자와 상담했습니다..

검사시 : 신장 160cm, 체중 120kg, 영양 증가.

생화학 연구 결과 : 혈당 2.7mmol / l.

혈당을 평가하고 저혈당증의 원인을 찾으십시오..

귀하의 권장 사항 : 대답은 고 인슐린 증일 수 있습니다. 호르몬과 저혈당증의 단백 동화 효과가 분명합니다.

8. 30 분 후. 설탕 100g을 먹은 후 환자의 혈당치가 1.5 배 증가했고, 빵 100g을 먹은 후에도 변화가 없었다. 답변 설탕은 쉽게 소화 할 수있는 탄수화물이며, 소화는 당-이소 말타아제 복합체의 작용으로 만 일어나므로 혈당을 빠르게 증가시키는 반면 빵 전분은 췌장 아밀라아제와 말타아제의 작용으로 오랫동안 소화되어 혈당이 증가하지 않습니다.

과일과 음료의 글루코스 수치를 정량화하는 간단한 방법

주스에서 설탕의 정량적 결정을 위해 다양한 방법이 사용되며 이는 매우 비용이 많이 들고 구현에 많은 시간과 장비가 필요합니다. 또한 사용 된 방법 중 일부는 특정 당의 비율을 결정할 수 없습니다. 위의 내용을 고려하여 음료에서 포도당을 측정하는 간단한 방법을 찾고 테스트하기 위해이 작업의 목표를 설정했습니다. 가장 적합한 방법은 혈청 내 포도당을 측정하는 데 사용 된 포도당 산화 효소 효소 분석 방법입니다. 연구에 따르면이 방법은 과일과 음료 모두에서 포도당을 측정하는 데 적합합니다. 제안 된 포도당 산화 효소 방법은 식물 원료 및 가공 제품에서 포도당을 결정하는 데 사용할 수 있습니다 (다른 탄수화물 존재 하에서)..

이 방법은 저렴하고 뛰어난 기술과 값 비싼 장비가 필요하지 않으며 표준 화학 시약 세트를 사용합니다..

주스의 설탕을 정량적으로 정의하기 위해 몇 가지 다른 방법이 사용됩니다. 하나는 다소 비싸고 많은 시간을 소비하며 성능을 위해서는 특수 장비가 필요합니다. 게다가,이 방법 중 일부는 콘크리트 설탕의 비율을 정의 할 수 없습니다. 모든 것을 고려하여, 우리는 주어진 작업의 목적에 따라 음료에서 포도당을 정의하는 간단한 방법을 찾고 승인했습니다. 가장 적합한 포도당 산화 효소 방법이 나타 났으며, 이는 혈당에서 포도당을 정의하는 데 사용됩니다. 연구에 따르면 주어진 방법은 과일과 음료의 포도당을 정의하는 데 적합합니다. 제공되는 포도당 산화 효소 방법은 식물성 원료 및 그 가공 제품에서 포도당 (다른 탄수화물 존재시) 정의에 사용할 수 있습니다.

이 방법은 접근이 가능하며 뛰어난 기술과 값 비싼 장비가 필요하지 않으며 표준 화학 시약 세트를 사용하지 않습니다..

시사:

제 7 절 농산물의 품질 관리 및 안전

정량적 정의
과일과 음료의 포도당 수치

Biol 후보. 과학, 부교수 V.I. 코마 로바,
Cand. chem. 과학, 부교수 S.M. Tyrina

볼고그라드 농업 대학교
400002, Volgograd, st. Institutskaya, 8

음료의 영양가는 주로 쉽게 용해되는 탄수화물 (당)의 함량에 따라 결정됩니다 : 포도당, 과당, 자당 [1]. 정량적 측정을 위해 다양한 화학적 및 물리 화학적 방법이 사용됩니다 [2]. 화학적 방법 (Bertrand의 방법, 요오드 측정 방법 등)은 비용이 많이 들고 상당히 방대하며이를 수행하는 데 많은 시간과 장비가 필요합니다. 또한 사용 된 일부 실험실 방법 (Bertrand의 방법)은 특정 설탕의 비율을 개별적으로 결정할 수 없으며 음료에 존재하는 총 설탕의 양만 결정합니다. 이 문제에 대한 문헌에보고 된 태아 포도당 데이터는 매우 드뭅니다 [3]. 그러나 포도당 수치는 주스의 자연 스러움을 식별하는 지표 중 하나입니다. 반면, 현재 음료의 포도당 측정을위한 호스팅 방법은 개발 중입니다..

위의 내용을 고려하여 음료에서 포도당을 측정하는 간단한 방법을 찾고 테스트하기 위해이 작업의 목표를 설정했습니다..

재료 및 방법

1. 주스와 과즙.

연구를 위해 볼고그라드 지역에서 자라는 가장 일반적인 사과 품종과 사과, 오렌지, 파인애플 주스 및 상업용 과즙 (Wim-Bill-Dann 회사의 베스트셀러 샘플 12 개 (100 % Gold Premium, "J-7"), CJSC "Multon"( "Kind", "Nico"), LLC "AMTEL SOFT DRINKS"( "AMTEL"), APK "Pridonye"( "Mine", "Sady Pridonya") 등 ). 또한 감귤류 (오렌지, 감귤, 자몽).

신선한 과일 주스를 짜낸 다음 원심 분리 (8000rpm, 원심 분리 시간-5 분)하여 얻었습니다. 얻어진 약한 색의 용액을 마개가있는 시험관에 10 분 이하로 저장하고 실험에 사용 하였다..

가장 적합한 것은 포도당 산화 효소였습니다. 혈청 내 포도당을 결정하는 데 사용되는 효소 분석 방법 (세트 "GLUCOSA-FKD", LLC "Pharmaceuticals and Clinical Diagnostics", Moscow). 이 방법의 단점은 보관 중 효소 활성이 감소한다는 것인데, 이는 정기적 인 보정이나 신선한 시약의 사용으로 보상 할 수 있습니다. 장점은 가용성, 저렴한 비용, 분석 용이성입니다..

2. picrate 방법에 의한 총 설탕 함량 결정.

0.1ml의 1.2 % picric acid를 2ml의 주스 (감즙) 희석액에 첨가하고, 흔들고, 0.1ml의 20 % NaOH 용액을 첨가 하였다. 그 후 튜브를 마개로 닫고 끓는 수조에 5 분 동안 두었다. 이 시간 동안 설탕은 picric acid를 주황색 화합물로 감소시킵니다. 샘플은 KFK-2에서 비색되었고, 샘플의 광학 밀도는 0.01 mol / L 포도당 용액에 구축 된 검량선에 따라 탄수화물의 양 (g / L)으로 변환되었습니다..

3. 포도당 측정 솔루션.

효소 발색성 혼합물은 "GLUCOSE-FKD"의 표준 세트 (지침에 따라 희석 : 증류 된 H 2 O 100ml 당 1 정)로부터 제조되었습니다. 또한 제공된 교정기를 사용하여 포도당 용액 1ml mol / L를 사용하고 교정 곡선을 작성했습니다..

4. 포도당 측정 방법.

2.5ml의 시험 용액에 0.2ml의 효소-발색성 혼합물 (실험) 또는 0.2ml의 증류 된 H2O (대조군)를 첨가 하였다. 두 샘플을 모두 37 ° C에서 15 분 동안 배양하고, 흔들고 (그 후 샘플에서 빨간색이 나타남) KFK-2 광 색도계 (러시아), 파장 490nm, 광학 경로 길이가 0.5cm 인 큐벳에서 물에 대한 비색을 측정했습니다. 데이터는 검량선을 사용하여 포함 된 포도당의 양 (mmol / l)으로 변환되었습니다..

결과 및 논의.

실험 결과는 표 1에 나와 있습니다. 연구는이 방법이 과일과 음료 모두에서 포도당 측정에 적합하다는 것을 보여주었습니다. 겨울 사과 품종의 포도당 함량은 연구 샘플 질량의 2.05  0.75 %이며, 감귤류 (감귤, 오렌지)의 1.5 % 이내로 문헌 자료의 데이터에 해당합니다 [4-6].

사과 주스에서 우리가 결정한 포도당 함량은 총 탄수화물 양의 2.5 %에서 3.2 %였으며, 이는 과일 [1], [3]의 포도당 양과 관련이 있으며 주스에 대한 문헌 자료 [5] 및 주스 포장 정보.

반면에 사과 과즙에는 최대 4 %까지 더 많은 포도당이 있습니다. 파인애플 주스와 과즙에서 포도당은 5 %에서 11 %입니다. 이것은 대부분의 프로토 타입의 포장에 표시된 자당이 첨가되었음을 나타낼 수 있습니다 (파인애플 주스 "J-7"제외)..

따라서 제안 된 포도당 산화 효소 방법은 식물 원료 및 가공 제품에서 포도당을 결정하는 데 사용할 수 있습니다 (다른 탄수화물의 존재 하에서)..

이 방법은 저렴하고 뛰어난 기술과 값 비싼 장비가 필요하지 않으며 표준 화학 시약 세트를 사용합니다..

  1. Beyul. EA, Ekiseniena NI 외. 인간 영양의 야채와 과일. -M.: Medgiz, 1959 년.
  2. Campuzano S., Loaiza O.A., Pedrero M., de Villena F.J., Pingarron J.M. 포도당과 과당의 동시 측정을위한 통합 된 비 엔자임 포도당 산화 효소-과당 탈수소 효소-테트라 티아 풀 발렌 -3- 메르 캅토 프로피온산-금 전극. // 생 전기 화학. 2004. V. 63.
  3. F.V. 체 레비 티 노프 신선한 과일과 채소의 화학 및 상품 과학. -M.: Gostorgizdat, 1949 년
  4. Matveeva R.N., Butorova O.F. 및 기타 식물원에있는 큰 열매를 맺은 사과 나무의 열매에있는 추출물의 함량. V.M. 크루 토프 스키. // 식물 재료의 화학. 1998. No. 2.
  5. Skurikhin I.M., Nechaev A.P. 화학자의 관점에서 볼 때 음식에 관한 모든 것. -M. : 더 높습니다. 학교, 1991.
  6. 식품 화학. Ed. A.P. Nechaeva -상트 페테르부르크 : GIORD, 2003.

저자에 대한 정보

  1. Komarova Valeria Ivanovna, 생물학 후보, 연기 학과 부교수. Volgograd State Agricultural Academy의 화학, 전화. (8442) 43-18-35
  2. Tyrina Svetlana Mikhailovna, 화학 과학 후보, 부교수. Volgograd State Agricultural Academy의 화학. (8442) 43-18-35

V.I. Komarova는 서신을 담당합니다..

집 주소 : 400066, Volgograd — 66, st. Chuikova, 43 세, 아파트 38 세

혈당 측정 방법

계획

주제 : 임상 및 생화학 실험실

완성 자 : Le M.J.

확인자 : Grigoryan B.R.

카잔-2016

함유량

출연자 목록

분석 목록

장치 목록

조리기구 목록

최대 1000 µl의 필터가없는 팁;

최대 200µl의 필터가없는 팁;

최대 10 μL의 필터가없는 팁;

최대 5ml의 필터가없는 팁;

1.5 ml 마이크로 튜브 용 스탠드 "슬레이브 장소", 5x10 장소;

Eppendorf 피펫 용 캐 러셀 랙;

테스트 튜브 랙;

최대 1000μl의 팁 지원; 최대 200 μl; 최대 10 μl;

2-20μl 필터가있는 자동 가변 용량 디스펜서 Reference ®;

20-200 μl 필터가있는 자동 가변 용량 디스펜서 Reference ®;

100-1000 μl 필터가있는 자동 가변 용량 디스펜서 Reference ®;

500-5000 μl 필터가있는 자동 가변 용량 디스펜서 Reference ®;

이중벽이있는 3.2 % 구연산 나트륨이 함유 된 진공관;

12 개의 시험관 D (9-16) mm (Greiner) 운반용 원형 컨테이너;

장갑 니트릴 질감 M;

장갑 니트릴 텍스처 S;

장갑 니트릴 텍스처. 엘;

Vacuette 23Gх3 / 4 ″ 버터 플라이 바늘 (루어 어댑터 및 홀더 포함);

지혈 용 마이크로 튜브;

최대 100ml의 스토퍼가있는 실린더;

삼각 플라스크 (원뿔형);

각각 32 개의 큐벳이있는 6x10 로터 샘플을 배치하기위한 BFA / BCT 시스템 (교반기 포함)

팁 드롭 용 컵 (4 개)

채혈을위한 지혈대.

시약 목록

혈당 측정 방법

정상 혈당이 표에 나와 있습니다.

포도당 산화 효소법에 의한 포도당 측정에 필요한 시약

1. 염화나트륨 9g / 리터 (등장 성 용액) : 0.9g NaCl을 물 100ml에 용해시켜 제조.

2. 황산 아연, 50g / l : 황산 아연 (ZnSO4) 5g을 물에 녹이고 부피를 100ml로 조정.

3. 수산화 나트륨, 0.3 mol / l : 1.2 g의 NaOH를 100 ml의 물에 용해시켜 제조하고, 농도는 적정으로 확인 (0.3 n이어야 함).

4. 오르토 톨루이딘, 1 % 용액 : 약물 1g을 100ml의 절대 알코올에 녹입니다. 용액은 몇 달 동안 지상 마개가 달린 병에 담긴 냉장고에 보관할 수 있습니다. 시판되는 제제는 재결정 화에 의해 정제 할 수 있으며,이를 절대 알코올에 녹이고 물을 첨가하고 석출 된 결정을 필터로 빨아 들인 다음 염화칼슘으로 건조.

5. 아세테이트 완충 용액 pH 4.8 : 0.25N 아세트산 4 부 (적정으로 확인)와 0.25N 아세트산 나트륨 6 부 혼합 (1 리터에 34g CH3COONaX 3H2O 함유).

6. 포도당 산화 효소는 3000 U / mg 이상의 활성을 가진 건조 제제입니다.

7. 양 고추 냉이 과산화 효소. 1mg을 아세테이트 완충액 5ml에 녹여 냉장고에 며칠 동안 보관할 수 있습니다..

8. 작동 시약 : 포도당 산화 효소 2mg과 과산화 효소 1mg을 아세테이트 완충액 80ml에 녹이고 1 % 오르토 톨루이딘 용액 1ml를 가하여 혼합하고 완충액으로 부피를 100ml로 조정합니다. 작동 시약은 투명하거나 무색이거나 약간 녹색을 띠어야하며,이 경우 냉장 보관시 안정적입니다. 색상이 강하거나 조제 후 몇 시간 후에 침전물이 형성되기 시작하면 오르토 톨루이딘이 충분히 순수하지 않아 재결정해야 함을 의미합니다..

9. 포도당 교정 용액. 포도당은 37 ° C에서 미리 건조되고 데시 케이 터에 저장됩니다. 먼저, 농도가 50 mmol / L 인 염기성 용액을 준비하고, 그 물질 180 mg을 (약 0.3 %) 벤조산의 포화 용액 20 ml에 용해시킵니다. 작동 교정 용액은이 용액에서 준비됩니다. 6; 아홉; 12; 열 다섯; 0.6이 취해진 18 및 21 mmol / l; 1.2; 1.8; 2.4; 삼; 3.6 및 4.2 ml의 스톡 용액을 10 ml의 부피로 포화 벤조산 용액으로 희석합니다. 이 용액에는 혈당과 같은 농도의 포도당이 포함되어있어 보정시 계산하기가 더 쉽습니다..

포도당 산화 효소법에 의한 포도당 측정

원심 분리 튜브에 염화나트륨 용액 1.1ml, 황산 아연 용액 0.4ml 및 0.3N NaOH 용액 0.4ml를 넣고 혼합합니다. 이것은 산화 아연 수화물의 매우 얇은 겔을 형성하고, 0.1ml의 혈액 또는 보정 용액이 방출되고 다시 혼합되고 10 분 후에 3000rpm의 속도로 10 분 동안 원심 분리됩니다..

상층 액 1ml에 작동 시약 3ml를 넣고 부드럽게 섞는다..

색상이 점차적으로 발달하기 시작하여 정상적인 실내 온도에서 13-15 분 만에 최대에 도달 한 다음 점차 감소합니다. 작업 샘플과 동시에 설정되는 빈 실험에 대해 적색 필터 (파장 625nm)가있는 광학 경로 길이가 1cm 인 큐벳에 작업 시약을 추가 한 후 항상 동일한 시간 간격으로 광도 측정이 이루어 지지만 혈액 대신 염화나트륨의 식염수를 채취합니다.

교정 그래프 작성시 혈액 검체 대신 해당 교정 액 0.1ml를 섭취하십시오..

포도당 수준의 계산은 포도당 농도 (mmol / l)가 한 축에 표시되고 다른 축에 소멸 값이 표시되는 구성의 경우 비율 규칙 또는 보정 그래프에 따라 수행 할 수 있습니다.

포도당 산화 효소법에 의한 포도당 측정 방법에 대한 참고 사항

1. 먼저 피펫의 혈액을 등장 성 염화나트륨 용액으로 방출 한 다음 황산 아연과 NaOH 용액을 추가 할 수 있습니다..

2. 체계적인 작업으로 모든 포인트에 대한 캘리브레이션 그래프를 지속적으로 구축 할 필요가 없으며, 3-9mmol / L 범위에서 블랭크 샘플과 매일 2-3 포인트를 처리하는 것으로 충분하며 시약 교체 또는 분석법 설정시에만 완전한 캘리브레이션 그래프 구축.

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